一、抑制实验
Sliva[1]报道灵芝有明显的抗乳腺和前列腺活性,并能抑制细胞的转移。
Shiao[2]发现灵芝三萜与洛伐他汀联合使用显示了潜在的抗效果。
Berovic[3]从灵芝深层培养物分离到的灵芝多糖(主要是β-D-葡聚糖),其对TNF-α的诱导活性与放人常用的支持罗莫肽的活性相当,提示灵芝多糖可用于放的辅助。
Miura[4]报道以大豆培养基培育的灵芝菌丝体提取物(GCP)(含β葡聚糖及异黄酮),能够抑制结肠的新生的形成。
Lu[5][6]实验证实灵芝菌丝体的水提取物具有抑制雄性F344大鼠结肠的作用。
Cao[7]报道了从灵芝中分离到的灵芝三萜(Lucialdehydes A-C),具有体外抗活性。其中lucialdehyde C显示了较强的抗LLC、T-47D及肉瘤180、Meth-A的细胞毒性,ED50值分别为10.7 mg·ml-1,4.7 mg·ml-1,7.1 mg·ml-1和3.8mg·ml-1。
Wu[8]从灵芝子实体中分离到两种新的灵芝三萜成份。并发现Lucidenic acid N(1), Lucidenic acid A和Ganoderic acid E,具有对细胞的细胞毒性。
中国科学院上海研究所丁健等[9]研究证实:“灵芝孢子+灵芝精粉”对人株、人结肠细胞株、人胃细胞株、人卵巢细胞株和人细胞株等多种实体瘤细胞和人株具有体外生长抑制作用,并呈现较好的量效关系(见表8-1);对lax-83在体内也有明显的抑制生长作用。
表8-1 灵芝孢子+灵芝精粉对细胞生长的抑制率(%)
浓度(mg·ml-1)
1.25
2.50
5.00
10.00
20.00
1C50
人P388**
人K-562**
人U-937**
人HL-60**
人胃细胞SGC-7901*
人胃细胞MKN-28*
人结肠细胞HCT-116*
人BEL-7402*
人细胞SPC-A4**
人细胞A-549**
人卵巢细胞H0-8910*
95.90
-11.60
12.30
34.90
6.50
12.60
-0.18
-4.60
32.00
10.10
6.00
75.50
-2.90
60.00
41.90
26.00
44.50
19.50
15.60
18.00
20.20
26.70
98.00
56.50
100.00
100.00
65.00
85.70
94.50
73.40
72.00
67.90
51.70
95.90
73.90
98.50
98.80
97.60
94.10
95.30
95.40
100.00
80.40
98.30
100.00
100.00
100.00
100.00
98.40
93.20
94.80
93.60
100.00
100.00
97.40
0.67
6.80
1.64
1.44
3.50
2.81
4.10
6.12
2.31
3.27
3.67
*SEB法 **MTT法
上海大学生命科学院邹朝中等[10]观察表明:“灵芝孢子+灵芝精粉”(浓度为20 mg·ml-1)对(BEL-7402、BEL-7404)抑瘤率达52.9%,“灵芝孢子+灵芝精粉”处理后的在光镜和电镜下可证实其凋亡的形态特征。
陈雪华等[11]通过荧光细胞检验技术、体外细胞毒性试验以及抑瘤率的测定,观察了灵芝孢子粉对荷HAC小鼠T细胞表面分化抗原,体外细胞杀伤功能以及抑瘤率的影响。
表8-2显示环磷酰胺组的小鼠总T细胞、T辅助细胞和T杀伤细胞均低于生理盐水组。而在灵芝孢子粉组中T细胞数量高于生理盐水组。
表8-2 灵芝孢子粉对荷HAC小鼠T细胞亚群表型的影响
组别
动物(n)
Thyl.2
L3T4
Lyt2
生理盐水组
环磷酰胺组
灵芝孢子粉组
6
6
6
56.3±7.6
50.2±8.5
63.4±5.6*
36.5±3.5
31.1±3.9*
41.2±4.1*
21.8±2.9
17.5±4.5*
25.0±5.6*
与生理盐水组比较,*P<0.05
表8-3显示环磷酰胺组的抗原特异性杀伤细胞(CTL细胞)对HAC、YAC-1以及P815细胞的体外杀伤功能均低于生理盐水组。而在灵芝孢子粉组中的CTL细胞对HAC和YAC-1细胞的杀伤功能明显高于生理盐水组,并具有统计学差异。
表8-3 灵芝孢子粉对小鼠CTL体外杀伤功能的影响
组别
动物(n)
HAC靶细胞
YAC-1靶细胞
P815靶细胞
生理盐水组
环磷酰胺组
灵芝孢子粉组
6
6
6
23.3±2.6
16.2±1.9
27.3±1.9*
16.5±3.8
11.1±0.9*
23.4±3.8*
17.8±5.8
15.5±5.1
20.0±6.1
与生理盐水组比较,*P<0.05
表8-4显示环磷酰胺组和灵芝孢子粉组的总抑瘤率分别为68.6%和42.2%。
表8-4 灵芝孢子粉对小鼠生长的影响(%)
组别
动物(n)
瘤重
瘤体积
总抑
瘤率
g
抑瘤率
cm3
抑瘤率
生理盐水组
环磷酰胺组
灵芝孢子粉组
6
6
6
5.5±1.9
1.8±0.9**
3.3±1.5*
/
67.3
40.1
4.3±1.2
1.3±0.9**
2.4±0.8*
/
69.8
44.2
/
68.6
42.2
与生理盐水组比较,*P<0.05;**P<0.01
实验结果显示灵芝孢子粉具有提高机体细胞免疫功能的能力。其一是通过提高小鼠的T淋巴细胞数量,其二是增强了小鼠CTL和自然杀伤细胞(NK)对细胞杀伤功能。而环磷酰胺组中的T细胞整体水平的下降,是由于环磷酰胺直接破坏了细胞DNA和影响细胞的复制,造成机体骨髓抑制、象下降的反应。在CTL对HAC自体和YAC-1、P815异种细胞的杀伤活性中灵芝孢子粉组的杀伤活性分别为27.3%、23.4%和20.0%,均高于生理盐水组的23.3%、16.5%和17.8%及环磷酰胺组的16.2%、11.1%和15.5%,提示灵芝孢子粉具有提高CTL的抗作用。环磷酰胺组的总抑瘤率为68.6%,而灵芝孢子粉组的总抑瘤率虽较低,但也可达42.2%,且无环磷酰胺的毒副作用。至于在表8-3中提及环磷酰胺组的抑瘤率高于灵芝孢子粉组是因为环磷酰胺是一种临床常用的,具有明显的直接抑瘤作用,但副作用大。因此从中寻找同时具有提高机体免疫力与抗作用的新药有重大意义。实验证明灵芝孢子粉不失为一种很有前途的抗。
张馨等[12]报道了灵芝孢子抗突变及抑制作用的实验研究。
小鼠骨髓细胞微核试验(结果见表8-5)。给小鼠灵芝孢子粉低、中、高各剂量组的微核率分别为29.4‰、27.0‰、25.4‰,均低于阳性环磷酰胺对照组32.4‰,且中、高剂量组与对照组相比有显著性差异(P<0.05,P<0.01)。
小鼠睾丸染色体畸变试验(结果见表8-6)。给小鼠灵芝孢子粉的各剂量组的染色体畸变细胞率均低于阳性对照丝裂霉素组,高剂量组与对照组比较有显著性差异(P<0.05)。常染色体和性染色体分离各实验组与对照组比较无显著性差异。
表8-5 灵芝孢子粉对环磷酰胺诱发的小鼠骨髓细胞微核的影响
剂量
g·kg-1(体重)
动物数
(只)
观察细胞数
(个)
微核数
(个)
微核率
(‰)
0.33
1.0
3.0
阳性对照
10
10
10
10
1×104
1×104
1×104
1×104
294
270
254
324
29.4
27.0*
25.4**
32.4
注:与阳性对照组比较,*P<0.05,**P<0.01
表8-6 灵芝孢子粉对丝裂霉素诱发的小鼠睾丸细胞染色体畸变的影响
剂量
g·kg-1(体重)
动物数
细胞数
单价体
染色体畸变数
(包括断片及易位)
(个)
畸变
细胞率
(%)
性分(%)
常分(%)
0.33
1.0
3.0
阳性对照
10
10
10
10
500
500
500
500